色譜檢測常用(yòng)技(jì)巧精選
一(yī)、柱子(zǐ)可(kě)以分(fēn)為(wèi)：₩β≈加壓，常壓，減壓
壓€ ÷β力可(kě)以增加淋洗劑的(de)流動速度，減少(sh•>₩ǎo)産品收集的(de)時(shí)間(jiān)，但≠"(dàn)是(shì)會(huì)減低(dī)柱子(zǐ)的(de)塔闆數δ®(shù)。所以其他(tā)條件(jiàn)>≈±相(xiàng)同的(de)時(shí)候，常壓柱是(shì)效率最•¥δ✔高(gāo)的(de)，但(dàn)是(shì)時(shí)間(jiā≈☆n)也(yě)最長(cháng)，比如(rú)，天然化(huà)合物(↑↕wù)的(de)分(fēn)離(lí)，一(yī)個(gè)柱子(zǐ ₩ )幾個(gè)月(yuè)也(yě)是(shì)有(÷≈yǒu)的(de)。
減壓柱能(néng)夠減少(shǎo)矽膠的(de)使用 (yòng)量， 感覺能(néng)夠節省一(yβ>ī)半甚至更多(duō)，但(dàn)是(shì)，由于大(dà)量的(de) σ空(kōng)氣通(tōng)過矽膠會(huì)使溶劑揮發（♥¥有(yǒu)時(shí)在柱子(zǐ)外(wài)☆÷面有(yǒu)水(shuǐ)汽凝結），以及有(yǒu)些 ₹↑(xiē)比較易分(fēn)解的(de)東(dō±→ng)西(xī)可(kě)能(néng)得(de)不(bù)到(dà∏®←★o)，而且還(hái)必須同時(shí)使用(y÷♠∏$òng)水(shuǐ)泵抽氣（很(hěn)大(©♠✔dà)的(de)噪音(yīn)，而且時(shí)間(jiān)長€♠•(cháng)）。以前曾經大(dà)量的(de)δ↔過減壓柱，對(duì)它有(yǒu)比較↓÷φ∑深厚的(de)感情，但(dàn)是(shì)自(zì)從(cóng)嘗試了♥α₽(le)加壓後，就(jiù)幾乎再也(yě)沒動過減壓的(de)念頭了(le)ε↓σ。
<; 加壓柱是(shì)一(yī)種比較好(hǎε← o)的(de)方法，與常壓柱類似，隻不(bù∞∞¥σ)過外(wài)加壓力使淋洗劑走的(de)快(kuài)些(xiē)。壓力¶Ω的(de)提供可(kě)以是(shì)壓縮空(kōng)氣，雙連球或者小δγ$(xiǎo)氣泵（給魚缸供氣的(de)就 ×(jiù)行(xíng)）。特别是(shì)在容易分(fēn)解∞¥的(de)樣品的(de)分(fēn)離(§≈↑✘lí)中适用(yòng)。壓力不(bù)可(kě)過大(✔∏÷ dà)，不(bù)然溶劑走的(de)太快(kuài)就(jiù)會(huì)減¥←§低(dī)分(fēn)離(lí)效果。個(gλ&πè)人(rén)覺得(de)加壓柱在普通(tōng)的(de)♠&>有(yǒu)機(jī)化(huà)合物(wù)♣↓∞的(de)分(fēn)離(lí)中是(shì)比較适用∞±(yòng)的(de)。
二、關于柱子(zǐ)的(de)尺寸，應該是(shì)又(yòu)×♠粗又(yòu)長(cháng)的(de)最好(hǎo)
&nbs>↕p; 柱子(zǐ)長(cháng)了(le)，相(xiàng)應塔闆數(s≈≠♣≤hù)就(jiù)高(gāo)。柱子(zǐ)粗了(l€βe)，上(shàng)樣後樣品原點就(jiù)小(xiǎo)（Ω ≥反映在柱子(zǐ)上(shàng)就(jiù)是(shì)樣品層比較薄），這☆φε✔(zhè)樣相(xiàng)對(duì)減小(xiǎo)了(le)分(fēnλ≤€€)離(lí)難度。試想如(rú)果柱子(z₩™ǐ)10 cm，而樣品層隻有(yǒu)2 cm，那(nà)麽分(fēn)£≠×離(lí)難度可(kě)想而知(zhī)，恐怕Ω✔€要(yào)用(yòng)很(hěn)低(dλ♥₽ ī)極性溶劑慢(màn)慢(màn)沖了(le)。如(r £ú)果樣品層有(yǒu) 0.5 cm，那(nà)麽各組分(fēn)就(♠β♥→jiù)比較容易得(de)到(dào)完全分(&☆fēn)離(lí)了(le)。當然采用(yòng)粗大(dà)↓≈♠"的(de)柱子(zǐ)要(yào)犧牲比較多(duō)的(€♥✘≥de)矽膠和(hé)溶劑了(le)，不(bù)過這(zhè)些(xiē)&≥★®成本相(xiàng)對(duì)于産品來(lái)說(shuō)也§δ∏(yě)許就(jiù)不(bù)算(suàn)什(shén)麽了($≥γle)（溶劑回收重蒸後也(yě)可(kě)減小(↔←€•xiǎo)了(le)部分(fēn)浪費(fèi)）。
現(xiàn)在常見(jiàn)的(de)☆柱子(zǐ)徑高(gāo)比一(yī)般為(wèi) ≈>1：5~10，矽膠量是(shì)樣品量的(de) ¶&30～40倍，選擇時(shí)要(yào)具體(tǐ)分(fēn)析α'←。如(rú)果所需組分(fēn)和(hé)雜(zá)質比較φ§♦♠容易分(fēn)開(kāi)（是(shì)指所需組分(fēn) β∞£Rf 在0.2～0.4，雜(zá)質相(xiàng ↑)差0.1 以上(shàng)），就(jiù)可(kě)以少( ♦σ$shǎo)用(yòng)矽膠，用(yòng)小(xβiǎo)柱子(zǐ)（例如(rú)200 mg樣品≤<，用(yòng)50px×500px柱子(zǐ)）；如(r←♦ú)果相(xiàng)差不(bù)到(dào) 0.1，就(jiù)要(≥★¥yào)加大(dà)柱子(zǐ)，可(kě)以增加柱子(zǐ)直徑，比如(rúσ≈♣)用(yòng) 75px 的(de)，也(yě)可(kě)以減小©"≤×(xiǎo)淋洗劑極性等。關于無水(shuǐ)無氧柱，适用(yòng)β于對(duì)氧，水(shuǐ)敏感，易分(fēn™®)解的(de)産品。
可(kě)&αε以濕柱，也(yě)可(kě)以幹柱。不(bù$₹ <)過在樣品之前至少(shǎo)要(yào&•≠λ)用(yòng)溶劑把柱子(zǐ)飽和(hé)一(yī)次，因為( wèi)，溶劑和(hé)矽膠飽和(hé)時(sh'≥í)放(fàng)出的(de)熱(rè)量有(yǒu)可(k↕→ě)能(néng)使産品分(fēn)解，畢竟要(yào)↑$分(fēn)離(lí)的(de)是(shì)π•∞敏感的(de)東(dōng)東(dōng)，小(xiǎo)心不(bù)₽β£為(wèi)過。因為(wèi)分(fēn)離(lí)的(de)東(dσ±ōng)西(xī)比較敏感，所以接收瓶一(yī)定要(y∑≈ào)用(yòng)可(kě)密封的(de)，遵循 sch☆± ∏lenk 操作(zuò)。
三、關于濕法、幹法上(shàng)樣
濕法省事 α<↓(shì)，一(yī)般用(yòng)淋洗劑溶解樣品，也(yě)可(kě)以用≈&₽(yòng)二氯甲烷、乙酸乙酯等。但(dàn)溶劑越少(sh↓∞•ǎo)越好(hǎo)，不(bù)然溶劑就(jiù)成了(le)淋洗劑了(✔•le)。很(hěn)多(duō)樣品在上(shàng)柱前是(shì)粘≠§φ乎乎的(de)，一(yī)般沒關系。可(kě)是(£♠♥☆shì)有(yǒu)的(de)上(shàng)πγ§樣後在矽膠上(shàng)又(yòu)會¶×(huì)析出，一(yī)般都(dōu)是(shì)比較大(dà)量的(de∑'♠)樣品才會(huì)出現(xiàn)，是(shì)因為(wè✘"i)矽膠對(duì)樣品的(de)吸附飽和(hé)，而樣品本身(shēδ∑n)又(yòu)是(shì)比較好(hǎo)≤'的(de)固體(tǐ)才會(huì)發生(shēng)，應該先重結晶，得(δ←∑≥de)到(dào)大(dà)部分(fēn)∏>的(de)産品後再柱分(fēn)，如(rú)果不(bù)能(néng)重<π α結晶那(nà)就(jiù)不(bù)管它了(le)，直接過就(jiùσ★'✘)是(shì)了(le)，樣品随著(zhe)淋洗劑流動會(huì)溶≠✘ 解的(de)。
有(yǒu)些(xiē)樣品溶解性差，能(n¶∏ éng)溶解的(de)溶劑又(yòu)不(₽bù)能(néng)上(shàng)柱（比如(rú)DMF，DMSO 等<≠π，會(huì)随著(zhe)溶劑一(yī)起走，顯色是±'<(shì)一(yī)個(gè)很(hěn)長(cháng)的(de)脫尾），這>φ ₽(zhè)時(shí)就(jiù)必須用(yòng)幹法上(s♣>hàng)柱了(le)。樣品和(hé)矽膠的↕¥(de)量有(yǒu)一(yī)種說(shuō)法 ✔∏是(shì) 1：1，應該是(shì)越少(shǎo)越好(hǎo)，但(dà☆✘n)是(shì)要(yào)保證在旋幹後，不(bù)能(nén₽≥ g)看(kàn)到(dào)明(míng)顯的Ω ☆(de)固體(tǐ)顆粒（那(nà)說(shuō)明(♥¶→míng)有(yǒu)的(de)樣品沒有( yǒu)吸附在矽膠上(shàng)）。
四、溶劑的(de)選擇
當然是(shì)最便→•宜，最安全，最環保的(de)了(le)，所以大(dà)多(¥♣duō)選用(yòng)石油醚，乙酸乙酯。文(wén)獻中有(yǒu←→•γ)用(yòng)正己烷的(de)，太貴了(le)，除非特♣βφ™别需要(yào)盡量不(bù)要(yào)用(yònβ★®g)，不(bù)然銀(yín)子(zǐ)嘩嘩的(de)，流的(de)比淋洗劑還±α<•(hái)快(kuài)，不(bù)過，因為(wèi)極性很(hěn)小(x•$iǎo)，有(yǒu)時(shí)還(hái)是(sh&★λì)非它不(bù)可(kě)。乙醚也(yě)可(kě)以用(yòng)，但←∑£≥(dàn)是(shì)，就(jiù)是(shì)容易睡(λ₽shuì)覺，注意保持清醒别讓溶劑流幹了(le)，那σ∞★±(nà)樣柱子(zǐ)也(yě)就(jiù)不(bù)爽'≥§★了(le)。
二氯甲烷也(yě)有(yǒu)用(yòng)的(de)，但(dàn)↓≈♦±是(shì)要(yào)知(zhī)道(♠σdào)，它和(hé)矽膠的(de)吸附₹✘是(shì)一(yī)個(gè)放(fàng)∑≤←熱(rè)過程，所以夏天的(de)時(shí)候經常會(huì)α•在柱子(zǐ)裡(lǐ)産生(shēng)氣✘♥泡，天氣冷(lěng)的(de)時(shí)候會(huì)好(hǎo)一(y£↑♥↕ī)些(xiē)。甲醇，據說(shuō)能(néng)溶解部分(fēn)矽α<×✘膠，所以産品如(rú)果想過元素分(fēn)析的(de)話(huà)要₹•(yào)留神，應該經過後繼處理(lǐ)，比如(rú)，重結晶等。其他≥≥(tā)溶劑用(yòng)的(de)相(xiàng≈<)對(duì)較少(shǎo)，要(yào)依不(bù)同需♦<要(yào)選擇。
由于某些(xiē)原∞>♦因，用(yòng)到(dào)的(de)淋洗劑多(duō)↕&是(shì)大(dà)包裝的(de)（便宜嘛），如(r≥"β✘ú)用(yòng) 10 L或 25 L塑&¥料桶裝的(de)， 要(yào)注意這(zhè)¥βδ±些(xiē)工(gōng)業(yè)品的(de)純度α↕是(shì)較低(dī)的(de)。經常能(néng)夠從(cóng)送來•©(lái)的(de)大(dà)桶底部看(kàn)見(jiàn)有(yα☆₹ǒu)色的(de)雜(zá)質，其他(tā)雜(zá)質就(jiù)>φ≥可(kě)想而知(zhī)了(le)， 所以在比較嚴格的(de)柱分(fē♥♥n)時(shí)就(jiù)要(yào)對(duì)溶劑重蒸。當然，過原♠β←料時(shí)就(jiù)可(kě)以免去(q♠ €≥ù)這(zhè)一(yī)步了(le)，反正下(xià)面還($∏hái)有(yǒu)提純的(de)方法。
另外(wài)，溶劑在過柱子(zǐ)後最好(h↓×ǎo)也(yě)回收使用(yòng)，一(yī)方面•™☆環保，另一(yī)方面也(yě)能(néng)節省 ☆πσ部分(fēn)經費(fèi)，缺點是(shì)要(yào£$)消耗一(yī)定的(de)人(rén)工(gōng)。這(zhè)裡←♦(lǐ)要(yào)注意的(de)是(shì)，一(y™£₩σī)般在過柱同時(shí)進行(xíng)的(de)是(shì)÷Ω減壓旋蒸，石油醚和(hé)乙酸乙酯的(de)比例由于揮↔≤↓±發度的(de)不(bù)同會(huì)導緻極性的λ$ ≈(de)變化(huà)，一(yī)般會(≤®©huì)使得(de)極性變大(dà)，在梯度淋洗時(shí)比較合适， 正好(hǎo)極性越來(lái)越大(d↔"≤à)了(le)。在過完柱子(zǐ)後，溶劑最後回收β©↔♠要(yào)采用(yòng)常壓，因為(wèi)在減壓旋蒸時(shí×®)會(huì)有(yǒu)部分(fēn)低(dī)沸點的(de)雜(zαφ©♠á)質一(yī)起出來(lái)， 常壓時(shí)λ✘就(jiù)會(huì)減少(shǎo)這(zhè)種現(xiàn)象ΩγΩ，如(rú)果雜(zá)質和(hé)你(nǐ)下(xià)面要(yào)過的(←¥de)樣品有(yǒu)反應那(nà)就(ji÷§•₩ù)慘了(le)。
五、關于操作(zuò)問(wèn)題
1.裝柱
柱子(zǐ)下(xià₩€§>)面的(de)活塞一(yī)定不(bù)要(yà$↔o)塗潤滑劑，會(huì)被淋洗劑帶到(dào)産品¶δ≤♣中的(de)，可(kě)以采用(yòng)四氟節門(méπ♣∞n)的(de)。幹法和(hé)濕法裝柱沒什(shén)麽區♦ε(qū)别，隻要(yào)能(néng)把柱子(zǐ)裝實↓↕φ就(jiù)行(xíng)。裝完的(de)柱子(zǐ)應該要(y≥§πào)适度的(de)緊密（太密了(le)淋洗劑走的(de)太慢(màn♣←π)），一(yī)定要(yào)均勻（不(bù)然樣品就(jiù)會(h↕uì)從(cóng)一(yī)側斜著(zhe)下(xià)來(lái)）₩。書(shū)中寫的(de)都(dōu)是(shì)不(bù)能(↓¥Ωnéng)見(jiàn)到(dào)氣泡，其實在大≈Ω(dà)多(duō)數(shù)情況下(xià)有(yǒ↓≠∑u)些(xiē)小(xiǎo)氣泡沒太大(dà)的(de)<α¥影(yǐng)響，一(yī)加壓氣泡就(β≈≠δjiù)全下(xià)來(lái)了(le)。當然如(rú)果你(nǐ)裝的(≥¶de)柱子(zǐ)總是(shì)有(yǒu)氣泡就(ji↔ ù)說(shuō)明(míng)需要(yào) •$δ多(duō)練習(xí)了(le)。但(dàn)$☆>₩是(shì)柱子(zǐ)更忌諱的(de)是(shì)開(kāi)裂，甭管豎的 ≥(de)還(hái)是(shì)橫的(de)，都(dōu)會(huì)影©ε(yǐng)響分(fēn)離(lí)效果，甚至作(zuò♠•∏Ω)廢！
✘×; 2.加樣
用(yòβng)少(shǎo)量溶劑溶樣品加樣，加完後将下(xià)面的(de)活塞打開©↑(kāi)，待溶劑層下(xià)降至石英砂面時(shí)，再加少(sh'π↕ǎo)量低(dī)極性溶劑，然後再打開(€δkāi)活塞，如(rú)此兩三次，一(yī♠β<)般石英砂就(jiù)基本是(shì)白✘§♥(bái)色的(de)了(le)。加入淋洗劑，一(yī)開≤≈♦∏(kāi)始不(bù)要(yào)加壓，等溶樣品的♠§↔(de)溶劑和(hé)樣品層有(yǒu)一(y¶÷®εī)段距離(lí)（2～100px 就(jiù↔&)夠了(le)），再加壓，這(zhè)樣避免了(le)溶劑（如(r♦≤ú)二氯甲烷等）夾帶樣品快(kuài)速下(xià)行(xín♣♦g)。
3.淋洗劑的(d$↓∞$e)選擇
επ♣ 感覺上(shàng)要(yào)使所需點在 Rf0.2~0.3 左右的Ωσ★♣(de)比較好(hǎo)。不(bù)要(yào)認為(wèi)在闆上∏♣(shàng)爬高(gāo)了(le)分(fēn)的(de)比較開(k≤♥₩&āi)，過柱子(zǐ)就(jiù)用(yòng)那(♣'nà)種極性，如(rú)果 Rf 在 0.6，即使相(xiàng)差§φ 0.2 也(yě)不(bù)容易在柱子(zǐ)上(shàng)分(fē÷≈↕n)開(kāi)，因為(wèi)柱子(zǐ)是(shì)一(yī)個(gè)✘¶多(duō)次爬闆的(de)狀态。
可(kě)以通(tōng)過公式的(de)比較：
0.6/0.8一(yī)次的(de)分(fēn)離(lí)度，肯定§₹<¥不(bù)如(rú)（0.2/0.3）的(de)三次方或四次方大(dà)。α≥
六、樣品的(de)收集
&nbs₽≈Ωp; 用(yòng)矽膠作(zuò)固定相(xiàng)過柱子(zǐ)的(×ε<de)原理(lǐ)是(shì)一(yī)個(gè)吸附與解吸的(de)平衡，所≠ £以，如(rú)果樣品與矽膠的(de)吸附比較強的(de)話(hu✘≥δ à)，就(jiù)不(bù)容易流出。這(zhè)樣就(jiù)會(¶★huì)發生(shēng)，後面的(de)點先出，而前面的(de)點後出。這φ"±$(zhè)時(shí)可(kě)以采用(yòng)氧化(huà)鋁作(zu§ ò)固定相(xiàng)。
另外(wài)，收集的(de)試管大(dà)小(xiǎo)要(yào)以樣品量而定，特别是(shì)小(xiǎo)量樣α§<∞品，如(rú)果用(yòng)大(dà)試管→♥↓，可(kě)能(néng)一(yī)根就(jiù)收到(©∑dào)了(le)三個(gè)樣品。嗚嗚，∏☆如(rú)果都(dōu)用(yòng)小(x₩¥α§iǎo)試管那(nà)工(gōng)作(zuò)量又(yòu)太大(dà♦'™)。
七、最後的(de)處理(lǐ)
柱分(fēn)後的(←&✔₹de)産品，由于使用(yòng)了(le)大(dà)量的(de)××溶劑，其中的(de)雜(zá)質也(yě)會(huì)累積到(dà >↓o)産品中，所以，如(rú)果想送分(fēn)§™析，最好(hǎo)用(yòng)少(shǎo)★∑♦量的(de)溶劑洗滌一(yī)下(xià ™)，因為(wèi)，大(dà)部分(fēn)雜(zá)質♦π 溶在溶劑裡(lǐ)，一(yī)洗基本就(jiù)沒了(le)，必要(yε≠ào)時(shí)進行(xíng)重結晶。
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